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A型产气荚膜梭菌病诱发哺乳仔猪猝死症的实验室诊断
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发布日期:2018-4-11 8:34:18 来源:河南省饲料工业协会 作者:

1892年,美国病理学家W.H.韦尔奇等最早分离到产气荚膜梭菌,因而又称韦氏梭菌或魏氏梭菌。该菌广泛存在于土壤、人和动物的肠道中,其致病性主要是由其所产生的外毒素引起的。

在生产中,由魏氏梭菌引起产房仔猪红痢的案例多有报道,但引起哺乳仔猪猝死的案例尚不多见。近日,通过实验室诊断工作,确诊一例由A型魏氏梭菌病诱发哺乳仔猪猝死症的案例,现报告如下:

一、发病情况

南阳地区桐柏县某养猪场,成立于2000年左右,规模为300头种猪,年出栏6000头商品育肥猪左右。于20171222日,养殖厂长向笔者反映,一晚上产房不同窝中出现急性死亡857日龄哺乳仔猪,因为死亡是发生于夜间,没有发现死前症状。另在其它窝中,发现四头精神不振,体温正常,但腹围增大、俯卧时四肢向腹部紧紧靠拢的疑似病猪。哺乳母猪临床表现健康,食欲旺盛,未发现异常。

二、诊断方法

1.病理剖检

病死猪外表可见腹围膨大,发绀,柔软,小腹部皮下水肿。打开腹腔后,发现大量肠道内容物充满整个腹腔,腥臭味严重。剖检消化系统,发现结肠处有一处破裂,肠内内容物均系此处流入腹腔。死亡8头哺乳仔猪,剖检症状均有结肠破裂这种现象,其他器官未见典型病变。

根据临床和剖检症状,无法判断疾病发生根本原因。继续剖检临床上腹围膨大的活体哺乳仔猪,外表可见轻度消瘦,腹围增大,精神稍差,神智清醒,打开腹腔后,发现小肠鼓气,结肠部位靠肠系膜侧严重不规则充血,内容物鲜黄。

 

2.形态与染色镜检

无菌分别取心、肝、脾、肺、肾、淋巴结及小肠等脏器组织涂片,进行革兰氏染色,并逐一镜检。记录镜检结果。

3.细菌分离培养

    取病死猪胃、肠内容物适量接种于普通肉汤培养基中,37℃摇床培养24 h。同时,将上述内脏样本匀浆后用少量灭菌生理盐水制成悬液,将组织悬液样本分别接种于普通琼脂平板和血琼脂平板上,分别37常规及厌氧培养24 h。仅在厌氧培养结果中发现有细菌生长,挑取单个菌落转种于厌氧增菌培养基中,37增菌培养24 h

厌氧增菌培养基、需氧增菌培养基、血琼脂平板、葡萄糖血琼脂平板购自青岛海博生物技术有限公司。普通肉汤培养基、肉肝汤培养基、普通琼脂培养基、牛乳培养基购自杭州天和微生物制剂有限公司。产气荚膜梭菌A型、B型、C型、D4种分型血清购自新疆生物制品厂。

4.细菌的致病性试验

1220g左右健康的小白鼠,分成2组。第16只,将37℃培养24 h的纯培养物肉汤培养液分别腹腔注射接种,每只0.12 ml;第26只,每只接种0.12 mL灭菌肉汤作为对照。

5.细菌的鉴定

()片、染色、镜检:取肝、脾、肾、胃、肠病料及纯培养物按常规方法制成触()片,革兰氏及瑞氏染色后镜检。生化试验:按常规方法进行生理生化特性鉴定。

6.血清型鉴定

将纯培养物接种于厌气肉肝汤中37培养8 h,培养物2000 r/min离心30 min。分别取上清液1 mL与等量的ABCD 4种分型血清混合,37℃作用45 min,每一个血清型分别静脉注射小白鼠2只,0.14 mL /只,观察24 h,根据结果确定分离菌血清型。

三、结果

1.细菌的分离与培养特性

该菌为严格厌氧菌。将肝、肠道内容物等直接涂片瑞氏染色,可见大量两端钝圆的粗大杆菌,独立或成双排列,短链较少,无鞭毛,不能运动。革兰氏染色阳性。有的菌体中央或近端有芽孢,芽孢小于菌体横径。在血琼脂平板上可形成荚膜,无芽孢。在葡萄糖血琼脂平板上形成圆形、光滑、隆起、淡黄色、直径2~4 mm的菌落,有的呈圆盘形,边缘成锯齿状。菌落周围有棕色溶血区,呈辐射状条纹。牛乳培养基中培养10 h后,,牛乳被酸凝,凝块呈多孔的海绵状。肉肝汤培养变得浑浊并产生大量气体。

2.生化试验

 

 

生化试验结果见表1

 

葡萄糖

麦芽糖

乳糖

蔗糖

鼠李糖

果糖

棉子糖

甘露醇

肌醇

水杨苷

牛乳发酵

明胶液化

卵磷脂酶

H2S

溶血试验

硝酸盐还原

吲哚

分离菌

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3.致病性试验结果

注射纯培养物肉汤培养液的试验组小鼠均死亡,注射灭菌肉汤的对照组小鼠均存活。

4.血清学分型鉴定结果

注射等量纯培养物悬液与A型血清混合物的小白鼠正常存活,而其他小白鼠全部死亡。说明A型血清中的抗体被特异性中和,由此可以确定该猪场的病原应该是A型产气荚膜梭菌。

四、小结和讨论

经对分离菌株进行厌氧培养、生化鉴定、动物接种、血清型鉴定,同时结合流行病学调查、临床症状观察、病理剖检等措施,确定该猪场产房仔猪猝死的原因是感染A型产气荚膜梭菌。产气荚膜梭菌可分为ABCDEF 6个血清型,其中A型和C型是导致动物发生疾病的主要病原。产气荚膜梭菌对养猪业的危害贯穿猪的整个一生,可引起乳猪的红痢、梭菌性仔猪腹泻、中大猪及母猪的胀气、坏死性肠炎及猝死。

A型产气荚膜梭菌是猪肠内正常微生物区系的一部分,但是它也可引起新生仔猪的肠道疾病。当产气荚膜梭菌或其芽孢被猪采食后在肠道内大量增殖,或当采食饲料过多而滞留于胃肠内,消化道蠕动不足,饲料、气候及环境的突变导致猪只抵抗力下降,肠道菌群失调,使肠道内原有的产气荚膜梭菌大量繁殖而发病。产气荚膜梭菌繁殖后,产生大量气体,不能及时从肛门排出,使胃肠鼓胀,压迫心脏和肺部,导致血液循环和呼吸系统功能障碍,最终导致猪窒息死亡。

发病场作为一个运行17年的老猪场,生产设备已趋于老化,环境清洁卫生及消毒工作存在漏洞。加之近年来受行情影响,生产效益下滑,母猪淘汰减缓,部分高胎次母猪可能携带有A型产气荚膜梭菌。哺乳期间,发病仔猪机会性获得母体的病原菌,导致此次临床病情发生。

抗生素只对产气荚膜梭菌本身起作用,对其释放的毒素无任何作用,采用有效合理的预防措施的意义大于治疗。本病发生与环境卫生有直接关系,故猪舍粪便应及时清理,栏舍定期消毒。合理配置日粮,保证饲料原材料质量,禁用霉变饲料或突然更换饲料。猪场若常爆发此病,可在冬春季节,在饲料中添加甲硝唑200g/吨,连喂3-5天。可起到较好预防效果。在母猪产前和产后半个月内饲料中添加酸化剂和微生态制剂,可有效缓解母猪便秘和梭菌在体内过度增殖,起到对仔猪安全保护作用。

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